1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.1 cbm简介 碳水化合物结合模块（carbonydrate-binding modules，cbm）是几种酶的小成分，其呈现独立的折叠和功能，以及特定的碳水化合物结合活性[1]。

cbm的主要功能就是提高酶的催化效率。

一般其通过结合碳水化合物底物拉近酶与底物的距离，有效增加了酶附近的底物浓度。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1本课题的主要研究的内容： 2.1.1 构建带有几丁质结合模块的绿色荧光蛋白基因； 2.1.2 利用大肠杆菌表达系统表达，并进行分离纯化； 2.1.3 验证对几丁质的吸附能力，考察在几丁质水解过程不同阶段所表达的特性 2.2研究中用到的研究方法： 2.2.1 构建质粒 采用takara公司的质粒DNA小量纯化试剂盒提取带有几丁质结合模块的质粒，利用xhoⅠ消化前述质粒，设计GFP引物并进行PCR扩增，扩增的目的片段与载体连接； 2.2.2 重组转化 表达感受态E.coli重悬于无菌0.1MCaCl2溶液中，加连接产物，冰浴30分钟，于42℃水浴锅中热激90s，取出冰浴2min，加入900μL LB培养基（不含抗生素），于37℃，200rpm培养1h，再12000rpm离心1min，弃去部分上清，重悬菌体，涂布于K-LB固体培养基平板上，37℃过夜培养，挑选单菌落于K-LB液体培养基，再进行酶切验证，甘油保存，同时测序； 2.2.3 表达纯化 将含有重组质粒的菌株接种于K-LB液体培养基，37℃培养过夜，将活化的种子接种到K-LB液体培养基培养，离心去上清，保留菌体，超声破碎，得粗酶液，利用亲和层析进行纯化； 2.2.4 验证特性