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多烯磷脂酰胆碱含量测定方法的建立及方法学验证开题报告

 2020-04-14 04:04  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

文献综述

多烯磷脂酰胆碱(ppc)是从大豆中高度浓缩提取的一种磷脂,主要活性成分为多聚磷脂酰胆碱二酰甘油,或多聚乙酰卵磷脂,是构成所有细胞膜和亚细胞膜的重要组成部分。其化学结构与内源性卵磷脂相同,但因它含有丰富的多种多价不饱和脂肪酸(亚油酸、亚麻酸和油酸),所以在功能上比体内的磷脂更卓越。口服或静脉使用后主要聚集于肝脏,通过淋巴或血液途径最先到达肝脏,并渗入细胞和亚细胞膜内,以整个分子主动地和肝细胞膜及细胞器膜相结合,变成生物膜的一部分,从而增加膜的完整性、稳定性和流动性,并且结合的过程并不消耗能量。大量的动物实验显示,使用ppc无中毒的潜在危险,因此被认为是安全无毒的植物类药物之一。

除了是一种生理性磷脂以外,ppc还有减少氧应激与脂质过氧化,抑制肝细胞凋亡,降低炎症反应和抑制肝星状细胞(hsc)活化等功能,从多个方面保护肝细胞免受损害。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

本课题是为了建立测定多烯磷脂酰胆碱样品中多烯磷脂酰胆碱的含量的方法及方法学验证,主要用采用高效液相色谱法来测定。

色谱条件与系统适用性试验 以硅胶为填充剂(色谱柱为sepax hp-silica 250mm#215;4.6mm,5μm或性能相当色谱柱), 柱温为40℃;按照水-冰醋酸-三乙胺(100:3:0.3)的比例配制水相,以水相-甲醇-异丙醇-正己烷(18:38:38:6)为流动相;检测器为蒸发光散射检测器。分别精密量取有关物质项下的多烯磷脂酰胆碱、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱储备溶液1.0ml、0.5ml、1.0ml至同一10ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,精密量取20μl注入液相色谱仪,出峰顺序为多烯磷脂酰胆碱、鞘磷脂、溶血磷脂酰胆碱,多烯磷脂酰胆碱峰与鞘磷脂峰之间分离度应符合规定,理论板数按多烯磷脂酰胆碱峰计算应不低于2500。

测定法 精密量取有关物质项下的多烯磷脂酰胆碱对照品储备溶液1ml、1.5ml、2ml、2.5ml、3ml,置10ml量瓶中,用甲醇稀释至刻度,摇匀,制成每1ml含多烯磷脂酰胆碱分别为100μg、150μg、200μg、250μg、300μg的溶液作为对照品溶液。精密量取上述对照品溶液各20μl,分别注入液相色谱仪,记录色谱图,以对照品溶液浓度的对数值与相应的峰面积对数值计算回归方程。另取本品约100mg,精密称定,置20ml量瓶中,加甲醇溶解并稀释至刻度,精密量取2ml,置50ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,作为供试品溶液。精密量取20μl,注入液相色谱仪,记录色谱图。由回归方程计算多烯磷脂酰胆碱的含量。

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