半乳糖基转移酶的克隆表达开题报告
2020-06-11 08:06
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
半乳糖基转移酶是催化从核苷二磷酸半乳糖中将活性半乳糖残基转移给糖基受体分子的酶。
不同的半乳糖基的转移由特异性不同的转移酶完成,即使转移相同的半乳糖基,由于半乳糖基的受体不同,形成的糖苷键也不同,也由不同的酶催化。
综述了近几年研究进展,半乳糖基转移酶以udp-半乳糖基为糖基供体,由于合成的二糖键不同,主要包括α1,3-半乳糖基转移酶,β1,3-半乳糖基转移酶以及β1,4-半乳糖基转移酶。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
解决问题: 1.NCBI的半乳糖基转移酶基因筛选 2.半乳糖基转移酶基因的分子技术-克隆和表达 3.温度对酶表达量的影响 4.诱导剂IPTG的量对酶表达量的影响 5.诱导时间对酶表达量的影响 6.简单催化体系的研究 研究手段: 1.NCBI筛选基因的使用 2.质粒的双酶切和目的基因的重组转化 3.基因pcr和菌落pcr 4.核酸胶和蛋白胶的定性分析 5.表达条件的优化 6.催化结果的高效液相定量分析
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