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COI基因和cytb基因在鉴定烤鳕鱼中鱼类物种组成上的比较分析开题报告

 2020-06-03 10:06  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

1.1 鳕鱼的营养价值

鳕鱼,又名大口鱼、大头青、狭鳕、明太鱼,一般指鳕科鱼的全体,为海洋深水鱼,是底层冷水性群聚鱼类。鳕鱼肉质厚实,细剌极少,肉味甘美。鳕鱼肉中蛋白质含量达到16.8%,比带鱼、三文鱼、鲳鱼、鲥鱼都高。而鳕鱼肉中所含脂肪和鲨鱼一样,只有0.5%,要比三文鱼低17倍,比带鱼低7倍。每100g鳕鱼可食部分含热量88.1kcal,蛋白质20.4g,钾321mg,钠130mg,钙 42 mg,镁84 mg,硒24.8μg,磷232mg,维生素a14μg,烟酸2.7mg,胡罗卜素1.2μg[1]

鳕鱼的肝脏含油量高,除了富含普通鱼油所有的dpa、dha外,还含有人体所必需的维生素a、d、e和其他多种维生素。鳕鱼肝油中这些营养成分的比例,正是人体每日所需要量的最佳比例。因此,北欧人将它称为餐桌上的”营养师”。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1 主要研究内容

(1)市场采集的共153份烤鳕鱼片样品的DNA提取

(2)通用引物扩增COI基因和cytb基因片段

(3)COI基因和cytb基因序列片分析

2.1主要研究手段

(1)DNA的提取

取约200mg肌肉组织于2ml圆底离心管中,加入200micro;l 组织裂解液(500 mM Tris-HCl pH 8.0, 100 mM EDTA, 100 mM NaCl, 2% SDS)和200micro;l磷酸盐缓冲液(300 mM pH 8.0),用无菌手术剪刀将肌肉组织剪碎。再向该离心管中加入20micro;l蛋白酶K(20mg/ml),并将离心管置于65℃恒温水浴锅裂解60min。裂解结束后,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。加入0.5倍体积的乙酸钠溶液(4M, pH 8.0),振荡混匀,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的2ml圆底离心管。再加入0.5倍体积的乙酸钠溶液,振荡混匀,14000g离心5min,吸取上清液并转入新的1.5ml尖底离心管。加入0.6倍体积的异丙醇,振荡混匀,静置5min后14000g离心10min,弃去上清液。加入800micro;l 70% 乙醇,振荡混匀,14000g离心3min。弃去上清液,再加入800micro;l 100%乙醇,振荡混匀,14000g离心3min,弃去上清。75℃烘箱烘干后加入30micro;l 灭菌超纯水溶解DNA,并置于-20℃贮藏。DNA的浓度和纯度(A260nm/A230nm和A260nm/A280nm)用核酸蛋白测定仪测定,并稀释至100ng/micro;l备用。DNA的完整性通过1%琼脂糖凝胶电泳检测。

(2)COI基因和Cytb基因通用引物序列(表1)

表1 COI基因和Cytb基因通用引物序列

Primer name

Primer sequence (5′-3′)

目标基因

FISHCOILBC_ts

CACGACGTTGTAAAACGACTCAACYAATCAYAAAGATATYGGCAC

COI

FISHCOIHBC_ts

GGATAACAATTTCACACAGGACTTCYGGGTGRCCRAARAATCA

C-CB280F

CACGACGTTGTAAAACGACTGCATTTACGCCCACATTGGCCGAGG

Cytb

C-CB431R

GGATAACAATTTCACACAGGGTGGCCCCTCAGAAGGACATTTGGCC

M13F (-21)

CACGACGTTGTAAAACGAC

NA

M13R (-27)

GGATAACAATTTCACACAGG

(3)采用Mega 5.0对序列进行分析

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