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摘 要

本次论文概述了高效液相色谱的历史发展、分类、特点、工作原理以及它的开发优化。分析方法与质量验证在不同的行业有不同的技术要求，医药、食品、化工行业对产品质量的控制是极为严格的，而高效液相色谱法是目前控制产品质量的一个重要技术。液相分析方法的技术开发主要包括流动相的配制、色谱柱的选择、检测波长的调整等一些方面。本次研究课题主要是对液相分析方法的开发及优化应用进行专题讨论和研究。

关键词：分析方法；高效液相色谱法；开发及优化

Liquid Phase Analysis Method Development And Optimization Of Related Parameters Selection And Adjustment

Abstract

In this paper, the historical development, classification, characteristics, working principle and optimization of high performance liquid chromatography are summarized. Analytical methods and quality verification in different industries have different technical requirements, medicine, food, chemical industry to product quality control is extremely strict, and high performance liquid chromatography is an important technology to control product quality at present. The technical development of liquid phase analysis mainly includes the preparation of mobile phase, the selection of chromatographic column, the adjustment of detection wavelength and so on. This research topic mainly discusses and studies the development and optimization of liquid phase analysis method.

Keywords:Analytical Method; High Performance Liquid Chromatography; Development And Optimization

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 引言 1

第二章 高效液相色谱的相关介绍 2

2.1高效液相色谱法 2

2.2色谱法的发展史 2

2.3高效液相色谱法的主要类型及其分离原理 2

2.3.1分配色谱法 2

2.3.2吸附色谱法 2

2.3.3离子交换色谱法 2

2.3.4空间排阻色谱法 2

2.4高效液相色谱分离类型的选择 4

2.5高效液相色谱的特点 4

2.6液相色谱与气相色谱的比较 4

2.6.1相同点 4

2.6.2不同点 4

2.7高效液相色谱的组成及作用 5

2.7.1高压输液系统 5

2.7.2进样器 5

2.7.3分离系统（色谱柱） 5

2.7.4检测器 5

2.8高效液相色谱的工作原理 6

2.9高效液相色谱的应用 6

第三章 影响因素及方法开发 7

3.1影响分离度的因素 7

3.1.1提高柱效（物理性质） 7

3.1.2改善色谱条件（化学性质） 7

3.2影响开发选择性的主要因素 7

3.2.1有机溶剂的性质 7

3.2.2流动相的选择 8

3.3简化的方法开发策略 8

3.4优化 8

3.5详细实验流程 8

3.6具体实验方法 9

3.7梯度优化 11

3.7.1方法优化与梯度斜率 12

3.7.2方法优化与温度 13

3.8波长的选择 13

3.9最终方法 14

3.9.1pH值的影响 16

3.9.2流动相pH选择性 17

3.10实例 18

3.10.1Auto Blend Plus技术的缓冲盐体系推荐（兼容LCMS） 19

第四章 总结与展望 21

4.1总结 21

4.2展望 21

致谢 22

参考文献 23

第一章 引言

高效液相色谱和经典液相色谱是有区别的，它是在20世纪60年代末，在经典液相色谱法和气相色谱法的基础上发展起来的新型分离分析技术。20世纪60年代末，随着色谱理论的发展，色谱工作者已经认识到采用微粒固定相是提高柱效的重要途径。随着微粒固定相的研制成功，液相色谱仪器制造商在借鉴气相色谱仪器研制经验的基础上，成功制造了高压输液泵和高灵敏度的检测器，从而使液相色谱法获得了进步。液相色谱在70年代中期慢慢被改进，经过近30年的发展，在基础理论、仪器装置和色谱柱等方面的研究已趋于成熟。液相分析方法也叫色谱法或层析法。它是一种高效能的分离技术，适用于医药和化工产品的分析检测项目中。高效液相色谱的应用领域极为广泛，现如今各大制药厂和检测所均使用这种方法对样品进行分析检测。高效液相色谱是基于气相色谱逐步发展起来的，两者之间既有相似点也有不同点。气相色谱法有许多优点。众所周知的是操作起来方便，样品被分析的速度快这两大特点。但是受某些条件的限制，热稳定性差的化合物是无法用气相色谱去检测的。相比之下，高效液相色谱法的要求就低很多了。待测样品只要能够在精确称量后用稀释液稀释定容，再移取适量进入进样小瓶就可以放在仪器上去运行了^[1]。但是想要顺利地开发出一套健全的分析验证方案并不是一件容易的事情。整个方案验证中必须包括流动相的配制、色谱条件的选择、梯度优化等内容，这些都需要分析实验人员经过慢慢地尝试和探索才能编写出较优的实验方法，从而通过实验进一步分析得到理想的结果。

Agilent（安捷伦）和赛默飞品牌的液相仪器结构外形设计独特、具有灵活多变的组合方式；卓越的系统性能指标；有好的图形化工作站界面，色谱分析领域更是有待进一步完善。在本次课题的讨论研究中，详细介绍了这两种品牌的高效液相色谱仪器的各种参数的设定和操作规程，用以探索最佳分离和分析条件。

第二章 高效液相色谱的相关介绍

2.1高效液相色谱法

高效液相色谱仪器和方法是20世纪发展起来的色谱分析技术。它是在经典液相色谱的基础上加入气相色谱的理论要点，在仪器组成结构上添加了高压输液泵和柱后检测器，为了能让高效液相色谱能够更高效地运行^[2]。

2.2色谱法的发展史

俄国植物学家茨维特在研究色素分离时，发现在实验中玻璃管中的色素相互分离，从外面看变成了一条色带。茨维特发觉色带和光谱一样，所以他把这种方法命名为色谱法。此后色谱法逐渐被用来分离无色的物质^[3]。

直到今天，色谱仪器和技术还在持续发展，更高效的色谱仪器会接踵而至。这些仪器和技术将会开拓出更广阔的领域。

2.3高效液相色谱法的主要类型及其分离原理

根据分离原理，液相色谱可分为：吸附色谱法、分配色谱法、空间排阻色谱法和离子交换色谱法。

2.3.1分配色谱法

样品在流动相中溶解后流进色谱柱，原理是流动相和固定相的溶解度不同，所以溶质能够在两相间进行分配。

2.3.2吸附色谱法

液固色谱法中的流动相是液体，固定相是固体吸附剂。它是通过不同物质的吸附能力不同实现分配的。

2.3.3离子交换色谱法

离子交换色谱是根据离子对交换剂具有不同亲和力使得可解离的离子和流动相中相同电荷的溶质离子进行交换的。

2.3.4空间排阻色谱法

空间排阻色谱用凝胶作为固定相，溶质在两相间按分子的大小不同来进行分离。

表2.1色谱法的分类

2.4高效液相色谱分离类型的选择

用高效液相色谱法对样品进行分离和分析，其方法的选择应考虑各种外在的因素，其中包括样品的性质、实验条件和应用范围等。

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