人表皮生长因子在大肠杆菌中的高效可溶性表达与纯化任务书
2020-05-02 05:05
1. 毕业设计(论文)的内容和要求
人表皮生长因子(hEGF)是由53个氨基酸组成,是人体内一种重要的多肽生长因子,它可促进伤口愈合,细胞增殖、分化以及在人体内分泌系统调节中具有重要作用。在临床治疗中具有很大的需求,而其主要从人尿液中提取获得,但由于人尿液中含量较少,且提取困难,近年来倾向于利用工程菌表达人表皮生长因子,大肠杆菌作为一种安全性的常用宿主,由于其遗传背景较为清晰、易于操作等优点成为了许多外源蛋白最常用的表达宿主之一。但人表皮生长因子结构含有三个二硫键,在大肠杆菌中表达易错误折叠形成包涵体结构,且蛋白分子量较小,在胞内易被蛋白酶降解,为解决表达问题,目前常用的分子手段有信号肽促进分泌表达,融合蛋白技术等。融合蛋白不仅可以帮助目的蛋白分泌表达,还可提高目的蛋白表达量,且融合蛋白分子量较大,不易被蛋白酶降解掉。而添加强力信号肽可促进目的蛋白分泌至周质空间或者胞外,周质空间的氧化环境可以促进二硫键的形成,得到折叠正确的蛋白,同时周质空间或者胞外蛋白酶含量较少,减轻了蛋白酶对目的蛋白的降解。基于这些技术可以高效大量合成人表皮生长因子蛋白,从而解决其来源问题。 |
2. 参考文献
请学生自行查找相关文献
3. 毕业设计(论文)进程安排
2018.12-2019.2 文献查阅,完成开题报告,熟悉实验仪器。
2019.3-2019.4 改造后信号肽ompA融合hEGF表达载体的构建
2019.4-2019.5 OmpA-hEGF表达条件优化
2019.5-2019.6 hEGF蛋白的纯化
2016.6 完成论文及答辩
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