1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

酸性磷酸酯酶（正磷酸单脂磷酸水解酶，acid phosphatase，e.c 3.1.3.2 acp)是一组在酸性条件下水解各种磷酸单脂的酶，但不能水解磷酸二酯，水解底物中的磷酸单酯键释放出无机磷，分子量2.3#215;104～9.6#215;104，最适ph值5.0～5.5，在ph值5.0～6.0之间最稳定，系统命名为邻磷酸单酯磷酸水解酶。酸性磷酸酶广泛存在于生物界，从低等生物大肠杆菌，酵母到高等动植物组织，体液以及人类肝脏、前列腺等都发现有acpase的存在。酸性磷酸酯酶在临床诊断、环境保护、饲料、生物试剂等领域有利用价值。kostrewa等报道了酸性磷酸酯酶的分子结构；gargova等报道了黑曲霉液体发酵产酸性磷酸酯酶的研究，发酵9 d达产酶高峰。根据acp分子中碳氢分布的不同，可将其分成20多种同工酶形式。现已证实，人体组织和血清中含有多种acp同工酶，它们是一组分子大小不均， 耐热性不同，对底物特异性不一， 对抑制剂和激活剂影响不等的同工酶。

研究酸性磷酸酯酶的意义与应用

1.酸性磷酸酯酶在饲料添加剂方面的作用

1.1 提高植酸磷的利用率，节约无机磷的消耗，降低环境污染

植物性饲料都含有1%～5%的植酸盐，这些盐的含磷量占饲料总含磷量的60%～80%。而单胃动物由于体内无相应的分解酶很难利用，饲料中的植酸鳞大部分通过粪便排出，对土壤、江河湖泊、池塘造成严重污染。一般认为，在饲料中添加磷酸酯酶可以使磷的利用率提高20％一60％，即意味着降低了30%一40%的植酸磷的排出量，具有巨大的生态效益。我国江河、水域污染极为严重，而造成污染的关键是水体中的氮和磷过量，每年从畜禽粪便中排出的磷就达250万吨之多，是水体富营养化的罪魁祸首之一。磷的排泄量递减，我国每年磷排放量可因此减少约180万吨，将大大缓解水体的磷污染。我国磷资源并不丰富，磷矿资源具有不可替代性和不可再生性，通过在土壤中添加酸性磷酸酯酶来降解土壤中的植酸，可有效节约无机磷的消耗，提高农作物产量，同时还具有改善土壤中磷分布的可能性。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

菌种发酵后酶液分离提纯的方法：凝胶过滤法也称分子排阻层析或分子筛层析

这是根据分子大小分离蛋白质混合物最有效的方法之一。柱中最常用的填充材料是葡萄糖凝胶（sephadex ged）和琼脂糖凝胶（agarose gel）。

(1)硫酸铵沉淀：取上清液，加入硫酸铵至饱和度40%，4℃，8000r/min 离心20min。上清液加硫酸铵至饱和度80%，置冰箱过夜。4℃，16000r/min离心30min，收集沉淀。

(2)透析：用0.2mol/l ph5.0 naac-hac 缓冲液(含2mmol/l 巯基乙醇)溶解沉淀，溶解液在0.005mol/l ph5.0 naac-hac 缓冲液(含2mol/l me，0.5%nacl)中透析，除尽so4。于4℃，16000r/min 离心30min，去除杂蛋白。