HPLC分离氨基酸方法在漆酶发酵中的应用文献综述
2020-04-07 04:04
文 献 综 述
漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,它能催化酚类物质的氧化还原反应。1883年日本学者吉田首次从日本紫胶漆树的渗透液中发现漆酶[1,2]。漆酶可存活于空气中,发生反应后唯一的产物就是水,因此,它本质上是一种环保型酵素。目前漆酶的研究与应用已取得一些突破性的成果,因此漆酶作为一种具有广泛潜在价值的酶越来越受到重视。
1.1氨基酸的检测方法及其应用
氨基酸是一类化学性质相似的生物活性物质。1985年Spackman[9]等首次报道了氨基酸自动分析的方法,经过50多年的发展,氨基酸分析方法得到不断的改进和完善,由最初的阳离子交换色谱分离-柱后茚三酮衍生化方法发展为多种分析方法并存,互相取长补短[10]。氨基酸分析,按照检测方法,可分为化学分析法,电化学方法(包括电导检测、安培检测)、分光光度法(包括可见光分光光度法、紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等。
1.1.1化学分析法
化学分析法一般包括甲醛滴定法和凯氏定氮法。甲醛滴定法[11]一般用于氨基氮的测定,可以测出样品中总氨基酸的含量,但该法准度差,终点较难掌握。凯氏定氮法[12]一般用于测定样品中总氮的含量,然后根据蛋白质和氨基酸中氮的含量,从而得知含氮的氨基酸、蛋白质的总量,该方法准确度高,但是操作步骤复杂、试剂耗量多、测定周期长。
1.1.2电化学分析法
采用适用于不同氨基酸的选择电极,可对各种氨基酸进行测定[13]。该法无需衍生反应,操作简便。
1.1.3分光光度法
如异硫氰酸苯酯(PITC)法:韩立强[14]通过谷氨酰胺与双(1,1-三氟乙酸基)碘苯(BTI)反应后酸水解,再用异硫氰酸苯酯衍生后,用高效液相色谱检测,结果发现,此方法能够对乳品中的Gln进行很好的定量。
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