论文总字数：13321字

摘 要

果葡糖浆主要成分是葡萄糖和果糖，其主要成分与蜂蜜中的糖成分十分相似，一些不法商家在利益的驱使下，将果葡糖浆掺到天然蜂蜜中。现如今，果葡糖浆是蜂蜜常见的掺假物之一，检测果葡糖浆中糖成分的含量具有重要意义。

实验采用对甲氧基苯胺作为糖类物质的柱前衍生试剂。实验对衍生温度以及衍生时间进行优化，最终确定衍生温度为65℃，衍生时间为3h。实验以R P –H P L C 为分离分析模式，选取甲醇－磷酸盐缓冲液体系作为分离3种糖类混合物的流动相，考察了缓冲液pH以及浓度对3糖混合物分离分析效果的影响，建立了一个应用广泛、快速、高效的分析方法。

实验结果表明，在0.0059~1.5mmol·L^-1范围内，除果糖外，其余糖衍生物的峰面积与其浓度均呈现良好的线性关系；在0.0117~1.5mmol·L^-1范围内，果糖衍生物的峰面积与其浓度呈良好的线性关系。同时实验还考察了分析方法的重现性，3糖混合物各成分峰面积RSD %范围为1.562%~2.475%，重现性良好。

关键词： 糖类 HPLC 衍生化

Detection of saccharides in HFCS by pre-column derivatization HPLC

Abstract

The high fructose corn syrup is made up of glucose and fructose , it’s main components are similar with the honey . Some unscrupulous businessmen mixed natural honey with HFCS in order to make more profit. Nowadays ,HFCS is one of common adulterant honey. It is significant to detect the content of saccharides in HFCS.

The experiment chooses p-methoxyaniline as the per-column reagent. Optimize the temperature and time of derive reaction, and ultimately determine the temperature of 65℃ and reaction time was three hours. Three kinds of saccharides was analyzed with RP-HPLC using methanol – phosphate as a mobile phase. The amount of pH and concentration of buffer had effect on the analysis results. Establish an analytical method that it is widely applicated, rapid, efficiently identified.

The experimental results show that, in addition to fructose, the peak and concentration of remaining sugar derivatives was linear in the range of 0.0059~1.5mmol·L^-1.The peak and concentration of fructose was linear in the range of 0.0117~1.5mmol·L^-1.At the same time, the result of mixture of three kinds of sugar shows that the RSD% of peak area is in the range of 1.562%~2.475%. The result shows that the analysis system has good reproducibility.

Keywords: saccharides; HPLC; derivatization

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1 果葡糖浆的概述 1

1.2 糖类物质检测方法 1

1.2.1 气相色谱法（GC） 1

1.2.2 高效毛细管电泳（HPCE） 2

1.2.3 高效液相色谱法（HPLC） 2

1.3 糖类物质分析方法的应用 2

1.4 研究目的及研究内容 3

第二章 实验方法 4

2.1 试剂与仪器 4

2.1.1 试剂 4

2.1.2 仪器 4

2.2 实验方法 5

2.2.1 糖储备液的配制 5

2.2.2 样品溶液的配制 5

2.2.3 衍生剂溶液的配制 5

2.2.4 还原剂溶液的配制 5

2.2.5 衍生方法 6

2.2.6 流动相的配制 6

2.2.7 色谱条件 6

第三章 结果与讨论 7

3.1 衍生试剂的选择 7

3.2 衍生温度的优化 7

3.3 衍生时间的优化 8

3.4 果糖存在形式的讨论 9

3.5 缓冲液pH值的优化 9

3.6 缓冲液浓度的优化 10

3.7 3种糖混合物的分离 11

3.8 分析方法的验证 12

3.8.1 方法的线性范围考察 12

3.8.2 方法的重现性考察 13

3.9 果葡糖浆中的糖分测定 14

第四章 结论 15

4.1. 结论 15

参考文献 16

致 谢 18

第一章 文献综述

1.1 果葡糖浆的概述

果葡糖浆又称高果糖浆（high fructose syrup，HFCS）是一种植物淀粉水解和异构化制成的淀粉糖，在食品中常作为甜味剂、保湿剂。果葡糖浆具有协同增效、冷甜爽口、吸湿性、抗结晶性、保湿性、抗龋齿性等特性^[1]。目前果葡糖浆已经发展三代。第一代是F42糖浆，葡萄糖含量较高，果糖含量较低，仅含有42%，而且低温时易结晶，不便于贮存；第二代是F55糖浆，果糖含量比第一代高，含量为55%，第三代是F90糖浆，果糖含量比第二代高，含量为90%。由于果葡糖浆的主要成分与蜂蜜中的糖成分十分相似，一些不法商家在利益的驱使下，在天然蜂蜜中掺杂果葡糖浆。现如今，果葡糖浆是蜂蜜常见的掺假物之一^[2]，检测果葡糖浆中糖成分的含量具有重要意义。

1.2 糖类物质检测方法

糖类物质检测方法有生物学法、化学法和仪器分析法等。生物学法大多数限定于特定的糖；化学法有斐林试剂法、高锰酸钾法、硫酸-蒽酮法、碘量法等^[3]，主要用于测定还原性糖或总糖含量；仪器分析法^[4-5]主要有气相色谱法（GC）、高效毛细管电泳（HPCE）、高效液相色谱法（HPLC）等，具有分析速度快、样品用量少、灵敏度高、容易实现在线分析和遥控监测等优点。本实验中，我们主要讨论糖类化合物的仪器分析方法。

1.2.1 气相色谱法（GC）

气相色谱是分析多糖结构的主要手段之一，测定糖类有很好的选择性、灵敏度高、样品用量少、分辨率强、分析速度快以及可用于定性及定量分析等优点^[6]。由于糖类物质的挥发性较低，必须将其预先转化成易挥发、对热较稳定的衍生物才能进行气相色谱分析^[7]。目前常用的衍生物有糖的三甲基硅醚衍生物、糖肟三甲基硅醚衍生物、糖腈乙酸酯衍生物等。氢火焰离子化检测器（FID）是目前分离鉴定衍生化糖时使用最多的检测器。

1.2.2 高效毛细管电泳（HPCE）

毛细管电泳（CE）的基本原理是当外电场一定时，不同离子由于性质不同而在溶液中的迁移速率存在差异从而实现分离。高效毛细管电泳的显著特点有高分离效率、高分析速度、高检测灵敏度、装置简单和分离对象广等^[8]。适用于离子化合物、中性化合物、两性化合物、生物大分子、细胞等多种对象的分析。因而在各领域得到了广泛的应用^[9-10]。毛细管电泳常用的检测器有紫外-可见光谱检测、荧光检测、激光诱导荧光检测、电导检测等。

1.2.3 高效液相色谱法（HPLC）

HPLC已经成为分析糖类物质最主要的方法，该方法具有迅速、简单、精确、分离度好等优点，尤其适用于测定热不稳定的单糖、低聚糖。高效液相色谱法检测器主要有有示差折射检测器(RID)、蒸发光散射检测器(ELSD)、紫外检测器（UV）等。示差折光检测器（RID）是一种常用的通用型检测器，几乎对所有物质都可以检测，而且不需要对糖进行处理，但是示差折光检测具有灵敏度较低，选择性较差^[11]等缺点；蒸发光散射检测器（ELSD）也是一种通用检测器，可以进行梯度洗脱，其灵敏度比较高，应用范围很广，尤其适合糖类的分析^[12]；紫外检测器（UV）灵敏度较高，但大部分糖类物质没有紫外吸收，因此紫外检测前必须通过衍生的方法使糖类变成具有紫外吸收的物质 ^[13]。

1.3 糖类物质分析方法的应用

在食品、酿造、化妆品、农产品、保健品及中成药制造等行业的产品质量检验中，常采用糖的组成、含量、种类作为产品质量评价指标。因此建立一个快速、简便、准确的方法对测定各种糖分的含量具有十分重要的意义。

林慧等^[14]通过HPLC-ELSD法同时测定食品中果糖、蔗糖、乳糖、葡萄糖、麦芽糖和木糖醇、赤藓糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、麦芽糖醇等10种糖和糖醇，选用蒸发光散射检测器，色谱条件选用柱温30℃，乙腈-水为流动相梯度洗脱，该方法在30min内完成了十种糖和糖醇的分离，灵敏度和重现性都比较好，符合无糖食品中糖和糖醇含量的定量检测。

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