利用易错PCR法定向进化ω-转氨酶开题报告
2020-07-02 10:07
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
转氨酶 (ec 2.6.1.x) 又叫氨基转移酶,是一种以磷酸吡哆醛 (plp) 为辅酶,能够将氨基供体的氨基基团转移至氨基受体羰基位置的生物催化剂。
根据转氨酶作用的底物,转氨酶可以分为α-转氨酶和ω-转氨酶两大类,与α-转氨酶不同,ω-转氨酶催化的两个底物,至少有一个为非α-酮酸或者α-氨基酸。
这两种转氨酶中ω-转氨酶能够通过手性拆分或者不对称合成的方法催化合成光学纯的手性胺类化合物和非天然氨基酸。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
易错pcr 基本技术体系的建立与完善 易错pcr 技术是采用多种方法提高dna 聚合酶的碱基错配率,并稳定非互补碱基对。
改变pcr 反应条件的方法主要有4 种; 一是使用低保真度taq 酶、并加大taq 酶用量; 二是调整反应体系中4 种dntp 的浓度,使之非1∶ 1∶ 1∶ 1的平衡浓度关系; 三是在反应体系中加入一定量的 ; 四是增加反应体系中的 浓度。
此外,降低起始模板浓度、增加每个循环的延伸时间、提高反应体系ph 值、增加循环次数等也都可以明显提高诱变率。
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