摘 要

紫杉醇是从红豆杉属植物中提取的一种具有抗癌活性的四环二萜化合物，是目前最有效的抗癌药物之一。由于红豆杉资源稀缺,所含的紫杉醇含量少,直接从红豆杉中提取紫杉醇无法满足市场需求，内生真菌发酵法产紫杉醇是目前制备紫杉醇的有效途径之一。本研究通过三株产紫杉醇的红豆杉内生真菌的发酵周期以及添加不同红豆杉品种的叶子浸出液对紫杉醇产量的影响，初步分析内生真菌产紫杉醇的最佳发酵条件。在发酵周期实验中，菌株F4的最佳发酵时间为4周，F5和F8的最佳发酵时间为一周，此时紫杉醇含量最高。不同树种浸出液的添加实验中，添加2%浓度的云南红豆杉、东北红豆杉、南方红豆杉和曼地亚红豆杉的叶子浸出液，F4、F5菌丝和发酵液中的紫杉醇含量均有所提升；添加2%浓度云南红豆杉叶子浸出液，F8菌液中的紫杉醇含量显著提高。总体来讲，添加了不同红豆杉品种叶子浸出液能使培养体系中的紫杉醇产量增加，可能是因为叶子浸提液中含有紫杉醇合成所必须的前体物质，对于发酵法制备紫杉醇的产业化有着一定研究意义。

关键词：紫杉醇 内生真菌 叶子浸出液 高效液相色谱

Effects of Leaf Extract on the Production

of Taxol in Endophytic Fungi

Abstract

Paclitaxel is a kind of tetracyclic diterpene compounds with anti-cancer activity extract from Taxus. It is one of the most effective anti-cancer drugs. Due to the scarcity of Taxus resources, the content of paclitaxel is less, and the extraction of paclitaxel from Taxus can not meet the market demand. Taxol production by endophytic fungi is one of the effective ways to prepare paclitaxel. In this study, the optimum fermentation conditions of paclitaxel in endophytic fungi were analyzed by the fermentation cycle of three strains of Taxus chinensis, and the leaching solution of different leaves of different yew cultivars on paclitaxel production. In the fermentation cycle experiment, the optimum fermentation time of F4 was 4 weeks, and the optimum fermentation time of F5 and F8 was one week, and the content of paclitaxel was the highest. The addition of 2% concentration of Northeast yew, Taxus chinensis, Taxus Mairei, and Yew of Yunnan，and F4, F5 hyphae and the content of paclitaxel in the fermentation broth were increased. The content of paclitaxel in F8 bacteria was significantly increased by adding 2% In general, the addition of different leek leaves leaching solution can increase the production of paclitaxel in the culture system, probably because the leach extract contains the precursor material necessary for the synthesis of paclitaxel, and the industrialization of paclitaxel Significance.

  Key words: paclitaxel; endophytic fungi; leaf leaching solution; high performance liquid chromatography

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1红豆杉简介 1

1.2 紫杉醇概述 1

1.2.1直接从红豆杉属植物中提取 2

1.2.2 化学全合成紫杉醇 2

1.2.3 生物/化学半合成紫杉醇 2

1.2.4 微生物发酵法的优势 2

1.3 产紫杉醇内生真菌研究进展 3

1.3.1植物内生真菌的相关介绍 3

1.3.2分离产紫杉醇内生真菌 3

1.4提高内生真菌产紫杉醇含量的途径 3

1.4.1培养基的选择 4

1.4.2 培养基添加物 4

1.4.3培养基条件的选择 4

1.5本课题的研究目的和意义 4

第二章 实验材料与方法 7

2.1植物材料 7

2.2菌株与培养基 7

2.3 实验试剂 7

2.4 实验仪器 9

2.5红豆杉内生真菌的来源 9

2.6 三株内生真菌的生长条件优化 9

2.6.1 温度对三株内生真菌生长的影响 9

2.6.2 pH对三株内生真菌生长的影响 10

2.6.3糖浓度对三株内生真菌生长的影响 10

2.7 三株内生真菌产紫杉醇最佳发酵周期 10

2.8不同树种浸出液对红豆杉内生真菌产紫杉醇的影响 10

2.9真菌发酵紫杉醇的提取 10

2.10液相色谱测定紫杉醇含量 10

2.10.1液相色谱条件选择 11

2.10.2 标准曲线的建立 11

2.10.3 紫杉醇含量的测量 11

第三章 结果与讨论 13

3.1三株真菌的最适培养条件 13

3.1.1温度对三株内生真菌生长的影响 13

3.1.2不同pH对三株内生真菌生长的影响 15

3.2.三株内生真菌的最佳发酵时间 16

3.3添加不同种叶子浸出液对三株内生真菌产紫杉醇含量影响 16

3.3.1不同树种浸出液对F4产紫杉醇的影响 17

3.3.2不同树种浸出液对F5产紫杉醇的影响 18

3.3.3不同树种浸出液对F8产紫杉醇的影响 19

3.3.4三株内生真菌最佳发酵体系的比较 19

第四章 结论与展望 20

4.1 实验结论 20

4.2实验展望 21

参考文献 22

致谢 25

第一章 文献综述

1.1红豆杉简介

红豆杉属植物是在第四纪冰川后留下的濒危物种。它生长缓慢，成材一般西药50-250年。红豆杉属植物目前已知的共有大约12种左右，喜温热气候，故主要分布于包括中国在内的北半球的温带至亚热带地区^[1]。