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嗜热链球菌来源的烟酰胺-核苷酸腺苷转移酶在大肠杆菌的克隆表达与酶学性质研究开题报告

 2020-06-04 08:06  

1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)

一、辅酶 1.1 辅酶的简介 辅酶(coenzyme)是一类可以将化学基团从一个酶转移到另一个酶上的有机非蛋白小分子[1]。

它与酶蛋白结合比较疏松(一般为非共价键结合)并可通过透析方法除去。

作为酶的辅酶,本身无催化作用,但一般在酶促反应中有传递电子、原子或某些功能基团(如参与氧化还原或运载酸基的基团)的作用[2],担当某种原子或化学基团的载体。

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1研究内容 从嗜热链球菌中克隆得到烟酰胺 - 核苷酸腺苷酰转移酶的基因,并将其构建在pet-28a表达载体上,最终在大肠杆菌rosetta(de3)中表达。

并对该酶的酶学性质进行研究。

2.2研究手段 本实验采取基因工程方式,获取嗜热链球菌的基因组,通过pcr扩增出的基因片段,通过酶切连接反应构建重组质粒,并将重组质粒在大肠杆菌中表达,通过sds-page,酶活性鉴定等手段对重组酶的性质进行分析。

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