摘 要

银杏全身都是宝，银杏树各个部位都含有黄酮类化合物、萜内酯和银杏酸等多种生物活性物质。为准确测定银杏叶、果、外种皮粗提物中生物活性成分的含量，做到资源利用最大化，本文探究了银杏外种皮、银杏叶及白果中生物活性物质的最佳提取条件，同时摸索出生物活性物质粗提物的液-液萃取的纯化分离方法。采用多步液-液萃取，可将银杏浸膏分离成四个部分，它们的主要成分分别为银杏酸、双黄酮、黄酮苷元、黄酮苷等。其最佳提取和分离条件包括：

（1）采用高速剪切破壁法于20℃按固液比1:10分别提取银杏外种皮、银杏叶及白果三次，每次提取30分钟，银杏外种皮、银杏叶、白果的最佳提取溶剂各自对应为93%乙醇、60%丙酮、80%~93%乙醇。

（2）测定结果表明，外种皮中银杏酸含量高，约87.2 mg/g，而其总黄酮含量却低于1 mg/g，总内酯含量约0.0046 mg/g。银杏秋叶中各黄酮类化合物都在5 mg/g左右，而其银杏酸含量仅为7.3 mg/g，总内酯含量为0.1060 mg/g。银杏春叶中黄酮类化合物为38.9 mg/g，同时也含有大量的银杏酸约为46.3 mg/g，总内酯含量为0.2803 mg/g左右。白果中黄酮类化合物含量较少，都低于0.1 mg/g，银杏酸含量约1.3 mg/g，总内酯含量为0.0577 mg/g。

（3）银杏粗提物旋蒸得到的浸膏采用萃取提纯，其液-液萃取的效率远高于固-液萃取，浸膏质量（g）：水层体积（mL）的最佳比例为5~10，浸膏质量（g）：油层体积（mL）的最佳比例为1:10。

（4）采用液-液萃取工艺能够将浸膏中的四种成分初步分离开来，得到固体A、B、C、D。其中固体A中含有银杏酸；固体B中含有双黄酮和极少量的银杏酸；固体C中含有的双黄酮、黄酮苷元、萜内酯和少量银杏酸；固体D中主要为黄酮苷。

关键词：黄酮类化合物；银杏酸；提取条件优化；液-液萃取

Abstract

Ginkgo biloba is a treasure, all parts of the body contains a variety of biological activities such as flavonoids and flavonoids.In this paper,we discuss the optimum extracting conditions of Ginkgo biloba leaves , ginkgo and the Sarcotesta of Ginkgo biloba, and worked out a method of liquid-liquid extraction for separation and purification , the multi-step liquid-liquid extraction of Ginkgo biloba extract is divided into four parts and the main conclusions are as follows: 

(1) At 20 ℃ by the solid-liquid ratio of 1:10,extracted three times and each time of 30 minutes by high-speed shear wall breaking method . Respectively selecting 93% ethanol, 60% acetone, 80%~93%ethanol as extraction solvent for the Sarcotesta of ginkgo, Ginkgo biloba, ginkgo is the optimum extraction conditions. 

(2) Episperm contains a large amount of ginkgo acid up to 87.2 mg/g, and the content of total flavonoids is lower than 1 mg/g, the content of total lactones is 0.0046 mg/g; the content of the flavonoid compounds in Ginkgo biloba autumn leaves is uniform at about 5 mg/g, compared with ginkgo leaf spring for only a small amount of ginkgolic acids was 7.3 mg/g, the content of total lactones is 0.1060 mg/g; flavonoids in Ginkgo biloba leaf spring main flavone glycosides of 38 mg/g, and also contain a lot of ginkgolic acids was about 38.9 mg/g, the content of total lactones is 0.2803 mg/g; Flavonoids is lower than 0.1 mg/g in Ginkgo, and ginkgo acid amount to 1.3 mg/g, the content of total lactones is 0.0577 mg/g.

(3) Ginkgo biloba extract in the extraction process, liquid - liquid extraction efficiency is much higher than that of solid-liquid extraction, the optimum ratio of extract weight (g): aqueous layer volume (mL) is 5 to 10, and the optimum ratio of extract weight (g): reservoir volume (mL) of is 1:10.

(4) Liquid-liquid extraction process can separate the four ingredients in the Ginkgo biloba extract initially and obtained the solid A, B and C. The solid A containing ginkgolic acids; solid B containing biflavonoids and a very small amount of ginkgo acid; solid C contains biflavonoids, flavonoid aglycones and a small amount of ginkgo acid; solid D is a flavonol glycoside. 

Key word: Flavanoids； Ginkgo acid； Optimization of extraction conditions；Liquid-liquid extraction

目 录

摘 要 I

Abstract II

目 录 1

第1章 绪论 1

1.1银杏生物活性物质的医疗保健作用及研究现状 1

1.2银杏叶提取物简介及其工艺研究发展 4

1.3本课题研究的目的、意义和内容 6

第2章 银杏外种皮、果、叶活性成分提取研究及其比较 8

2.1实验仪器及材料 8

2.1.1实验药品来源和规格 8

2.1.2实验仪器 9

2.2银杏叶、果、外种皮生物活性物质的联合提取工艺 9

2.2.1银杏外种皮中生物活性物质提取工艺研究 9

2.2.2银杏叶、果中生物活性物质的提取工艺研究 11

2.3本章小结 18

第3章银杏生物活性物质粗提物的萃取纯化研究 19

3.1萃取剂与萃取体系的选择 19

3.1.1萃取溶剂的选择 19

3.1.2萃取体系的研究 20

3.2水-油两相萃取组成比的研究与优化 21

3.2.1水层比例与活性成分提取量的关系 22

3.2.2溶剂层比例与活性成分提取量 23

3.3水-油两相萃取分离工艺的研究与优化 23

3.3.1水层的萃取研究 24

3.3.2油层萃取的研究 24

3.4各级萃取溶剂萃取次数与活性成分萃取量的关系 25

3.5本章小结 27

第4章 总结与展望 29

参考文献 30

致 谢 33

第1章 绪论

1.1银杏生物活性物质的医疗保健作用及研究现状

（1）银杏酚酸类

银杏酚酸属于漆树酸类物质，为6位取代有饱和或者不饱和的长链烷基的水杨酸，它们常见于咖秀树（cashew，Anacardium occidentale）的果实中^[1]。1954年Paul V J^[2]等人通过制备铅盐在低温条件下分级结晶以达到分离的目的，并采用催化加氢的方法确定了其不饱和度，最终得到单烯、双烯、三烯的结构。随着实验方法及检测技术的进步，关于银杏酚酸的具体结构体系也日臻完善，在2008年Kaur P^[3]等人的报道中就给出了银杏酚酸较为全面的结构式。