苯磺阿曲库铵有关物质分析方法确认验证毕业论文
2022-07-23 03:07
论文总字数：25089字
摘 要
目的：证明苯磺阿曲库铵有关物质分析方法符合预期标准。
方法：采用外标法，使用Agilent 1200高效液相色谱仪与Alltima C18 250×4.6mm 5 μm色谱柱对本方法进行确认验证。通过验证系统适用性、系统精密度、方法专属性、线性范围、检测限、定量限、方法精密度、溶液稳定性等几个方面证明方法符合预期标准。[9] [10]
结果：以上验证项目均符合规定。
结论：各验证参数符合预期标准，分析方法可以用于苯磺阿曲库铵有关物质的检测。
关键词：苯磺阿曲库铵；HPLC；分析方法
Abstract
Purpose: To validate that analytical method for Atracurium Besylate related compounds comply with the acceptance criteria.
Method: The analytical method for Atracurium Besylate related compounds was validated by using the Agilent 1200 HPLC system and a Alltima C18 250 × 4.6 mm 5 µm column, and calculated with external standard method. The validation item included following aspects: system suitability, system precision, specificity, linearity, range, LOD, LOQ, method precision, and solution stability.[9][10]
Results: All the above validated items comply with the acceptance criteria.
Conclusion: All the validated parameters comply with the acceptance criteria, and the analytical method is suitable to test related compounds of Atracurium Besylate.
Keywords: Atracurium Besylate, HPLC, Analytical method
前言
苯磺阿曲库铵是一种高选择性、短效非去极化的神经肌肉接头阻断剂。主要通过竞争胆碱能受体，阻断乙酰胆碱的传递而起作用，且可被新斯的明等抗胆碱酯酶药所逆转。苯磺阿曲库铵在体内主要通过霍夫曼消除快速代谢，代谢产物经肾脏排出。作用时间不受肝肾功能的影响，重复给药无明显蓄积作用。主要作用于各种外科手术中麻醉时的骨骼肌松弛，便于控制呼吸，尤其适用于气管插管时所需的肌肉松弛和剖腹产术时肌肉松弛。还用于持续输注以维持长时间外科手术中的神经肌肉阻滞。[1]
苯磺阿曲库铵是类白色结晶性粉末，易潮解，无臭，熔点85～90℃。易溶于甲醇、乙醇、乙腈、二氯甲烷，溶解于水，几乎不溶于乙醚、三氯甲烷。[2]
本研究主要是对其有关物质分析方法进行确认验证，考察该分析方法是否能够对苯磺阿曲库铵中各杂质进行控制，并且得到可靠的检验结果。
目录
摘要 I
Abstract I
前言 II
第一章 需验证的分析方法 1
1.1 色谱条件 1
1.2溶液配制 1
1.3系统适用性 2
1.4测试过程 2
1.5 计算 2
第二章 验证所使用的仪器、对照品及试剂 5
2.1验证所使用的主要仪器 5
2.2验证所使用的对照品与试剂 5
第三章 验证内容 6
3.1 系统适应性 6
3.2 溶液稳定性 8
3.3 系统精密度 10
3.4 方法专属性 11
3.5 检测限 23
3.6 定量限 25
3.7 方法精密度 31
第四章 验证结论 33
第一章 需验证的分析方法[9] [10] [12]
1.1 色谱条件[7] [8]
色谱柱：Alltima C18 250×4.6mm 5 μm
柱 温：25 ℃
流 速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
检测波长：280 nm
缓冲液：取10.2g磷酸二氢钾置1000-mL量瓶中，用950 mL水溶解，搅拌，用磷酸调节pH值至3.1，再用水稀释至刻度，混合摇匀。按此比例根据需要量调整。
溶液A：缓冲液-乙腈-甲醇（75:20:5），过滤，脱气。
溶液B：缓冲液-甲醇-乙腈（50:30:20），过滤，脱气。
流 动 相：使用可变比例的溶液A和溶液B。
梯度洗脱程序如表1-1-1
表 1-1-1 苯磺阿曲库铵有关物质梯度洗脱程序 | ||
时间（分钟） | 溶液A（%） | 溶液B（%） |
0 | 80 | 20 |
5 | 80 | 20 |
15 | 40 | 60 |
25 | 40 | 60 |
30 | 0 | 100 |
45 | 0 | 100 |
50 | 80 | 20 |
1.2溶液配制
1.2.1对照溶液
称取100mg苯磺阿曲库铵对照品，精密称定，置100-mL量瓶中，用溶液A溶解稀释至刻度，做为对照储备液。移取1.0mL此液至100-mL量瓶中，用溶液A稀释至刻度，摇匀。
1.2.2供试溶液
称取100mg苯磺阿曲库铵，精密称定，置100-mL量瓶中，用溶液A溶解稀释至刻度，摇匀。（现配）
1.3系统适用性
打印对照储备液色谱图，苯磺阿曲库铵中反-反异构体与顺-反异构体以及顺-反异构体和顺-顺异构体之间的分离度不小于1.5；记录反-反异构体，顺-反异构体和顺-顺异构体的保留时间。
打印对照溶液色谱图，记录峰面积，两次进样的苯磺阿曲库铵峰面积之间的相对偏差应不大于10.0%。
1.4测试过程
待色谱系统稳定后，按如下程序对有关物质进行测定：
(1) 取溶液A （Blank），进样1次；
(2) 取对照储备液（SST）1，进样1次；
(3) 取对照溶液（STD）1,2，进样2次，相对偏差1,2≤10.0%；
(4) 取供试溶液（Test solution）两份，每份进样1次；
(5) 取对照溶液（STD）3，进样1次，相对偏差2,3≤10.0%；
(6) 取照储备液（SST）2，进样1次。
用对照溶液（相对偏差）1,2, 2次进样考察系统适用性，用对照溶液（相对偏差）2,3 2次进样计算有关物质。
供试溶液连续进样超过6小时的，每隔6小时应追加对照溶液和对照储备液.各1针，用最近2次对照溶液的峰面积的平均值计算有关物质。
1.5 计算
用下面的公式计算苯磺阿曲库铵中任一杂质的百分含量（%）：
100（Cs/Cu）（ru/rT）（1/F）
公式中： F是杂质峰的相对响应因子；
Cs是对照溶液的浓度，单位mg/mL；
Cu是供试溶液的浓度，单位mg/mL；
ru是供试溶液中任一杂质的峰面积；
rT是对照溶液中顺-顺式异构体，反-反异构体，顺-反异构体的峰面积之和。
表1-1-2 杂质的相对响应因子、RRT、限度（任一小于0.05%的杂质忽略不计）如下表：
化学名 | EP名称 | 相对保留时间1 | 相对响应因子2 | 限度（%）3 |
R-酸 | 杂质E | 0.2 | 1.0 | 1.5 |
- | 杂质F | 0.25 | 1.0 | 1.0 |
N-甲基罂粟碱 | 杂质G | 0.3 | 2.0 | 1.0 |
四氢罂粟碱 | - | 0.33 | 2.0 | 0.10 |
R-单酯（反式） | 杂质D1 | 0.45 | 1.0 | 1.5 |
R-单酯（顺式） | 杂质D2 | 0.5 | 1.0 | |
反-反异构体 | - | 0.8 | 1.0 | - |
顺-反异构体 | - | 0.9 | 1.0 | - |
顺-顺异构体 | - | 1.0 | 1.0 | - |
单季铵盐（顺-反式） | 杂质A1 | 1.04 | 1.0 | 1.5 |
单季铵盐（顺-顺式） | 杂质A2 | 1.08 | 1.0 | |
- | 杂质I1 | 1.07 | 1.0 | 1.0 |
- | 杂质H1 | 1.07 | 1.0 | |
- | 杂质K1 | 1.09 | 1.0 | |
- | 杂质I2 | 1.12 | 1.0 | |
- | 杂质H2 | 1.12 | 1.0 | |
- | 杂质K2 | 1.12 | 1.0 | |
缩合物草酸盐 | 杂质B | 1.15 | 1.0 | 0.1 |
单丙烯酸酯（反式） | 杂质C1 | 1.2 | 1.0 | 1.0 |
单丙烯酸酯（顺式） | 杂质C2 | 1.3 | 1.0 | |
任一其他杂质 | - | - | 1.0 | 0.1 |
总杂 | - | - | 3.5 | |
1.相对保留时间的计算基于供试溶液中顺-顺异构体的保留时间来计算，根据PF37（4）数据，除四氢罂粟碱。 | ||||
2.相对响应因子是基于苯磺阿曲库铵来计算的，除四氢罂粟碱，其它杂质RRF是根据PF37（4）中苯磺阿曲库铵要求确定。 | ||||
3.根据ICH和PF37（4）中苯磺阿曲库铵杂质限度要求确定，同一格里的限度是指前面所有杂质和。 | ||||
第二章 验证所使用的仪器、对照品及试剂
2.1验证所使用的主要仪器
本次验证中使用的主要仪器见表2-1。 表2-1 验证使用的主要仪器 | |||
名称 | 型号 | 供应商 | |
高效液相色谱仪1 | 进样器 | G1329A | Agilent |
泵 | G1311A | ||
柱温箱 | G1316A | ||
检测器 | G1315D | ||
色谱工作站 | Chemstation | ||
高效液相色谱仪2 | 进样器 | G1329A | Agilent |
泵 | G1311A | ||
柱温箱 | G1316A | ||
检测器 | G1315D DAD | ||
色谱工作站 | ChemStation | ||
色谱柱 | C18 250×4.6mm 5 μm | Alltima | |
电子天平 | 十万分之一 | sartorius | |
电子天平 | 百分之一 | sartorius | |
精密pH计 | pHS-3C | 上海雷磁 | |
2.2验证所使用的对照品与试剂
本次验证中使用的主要对照品与试剂见表2-2。
2-2 验证使用的主要对照品与试剂
名称 | 规格 | 供应商 | 批号 |
苯磺阿曲库铵 | 对照品 | 本公司 | 20110916RS |
苯磺阿曲库铵峰鉴别对照品 | 对照品 | EP | n°1 |
磷酸 | AR | SCRC | T20100903 |
磷酸二氢钾 | AR | SCRC | F20111220 |
乙腈 | 色谱纯 | MERCK | I607730140 |
甲醇 | 色谱纯 | 江苏汉邦 | 113556 |
30%过氧化氢 | AR | SCRC | 20090623 |
杂质E | 对照品 | 本公司 | 20110719RS |
杂质F | 对照品 | 本公司 | n°1 |
杂质G | 对照品 | 本公司 | 20100407-2RS |
四氢罂粟碱盐酸盐 | 对照品 | 本公司 | 2011081601RS |
杂质D2 | 对照品 | 本公司 | 20110827RS |
杂质A2 | 对照品 | 本公司 | 20110314RS |
杂质B | 对照品 | 本公司 | 20110815RS |
杂质C2 | 对照品 | 本公司 | 20110822RS |
第三章 验证内容
3.1 系统适应性[6]
目的：确认操作者在使用Aglient液相色谱系统及其它电子仪器、实验器械等运行苯磺阿曲库铵有关物质的测定方法时的一套完整的系统是否符合要求。
3.1.1 操作要求
系统适用性溶液：取100mg苯磺阿曲库铵工作对照品，精密称定，置100-mL量瓶中，用溶液A溶解稀释至刻度，摇匀。重复进样5次。
对照溶液：取100mg苯磺阿曲库铵对照品，精密称定，置100-mL量瓶中，用溶液A溶解稀释至刻度，做为对照储备液。移取1.0mL此液至100-mL量瓶中，用溶液A稀释至刻度，摇匀。连续进样2针。
3.1.2 预期标准
分离度R≥1.5（系统适应性溶液中反-反与顺-反式异构体及顺-反和顺-顺式异构体之间）
相对偏差≤10.0%（以对照溶液中主峰峰面积计算）
3.1.3 结论
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