论文总字数：20305字

摘 要

目的：根据世界卫组织的数据，2015年约有1770万人死于心血管疾病，约占全球死亡率的31 %，许多心血管疾病均与血管内形成血栓有关，此外，血栓是一种常见的术后并发症，为了避免血栓形成，术后患者一般需要持续服用抗血栓药物。然而，由于溶栓药物在血浆中的半衰期较短，且存在全身副作用，在临床应用中效果有限。因此，开发一种能够将溶栓药物运送到血栓局部部位的药物递送系统，以实现更好的溶栓效果和减少全身副作用具有重要意义。

方法：本课题依次制备了粒径均一、稳定的纳米银粒子（Ag NPs）、介孔二氧化硅包裹的纳米银粒子（Ag NPs@SiO₂）以及包封了溶栓药物尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）的Ag NPs@SiO₂即Ag NPs@SiO₂-uPA，并分别进行了表征；最后进行了纳米体系体外细胞毒性试验以及体外溶栓效果的评价。

结果：实验结果表明，实验制备的Ag NPs@SiO₂粒径约为1540 nm，表面电位为-11.2 mV，纳米体系Ag NPs@SiO₂-uPA体外安全性实验表明其在一定浓度范围内对细胞无毒害作用，也无明显的溶血作用；其次体外溶栓实验中该体系展现出良好的溶栓效果。

结论：综上，药物载体Ag NPs@SiO₂粒径均一；纳米药物体系Ag NPs@SiO₂-uPA的体外安全性良好、体外溶栓效果良好。即通过上述纳米体系的构建能够实现更高效，精准，安全的溶栓治疗方案，符合精确医学的发展趋势。

关键词：抗血栓 纳米银 介孔二氧化硅 尿激酶纤溶酶原激活物（uPA）

Study on antithrombotic nano drugs

Abstract

Objective: According to the World Health Organization, approximately 17.7 million people died because of the cardiovascular disease in 2015, accounting for about 31 % of global mortality. Many cardiovascular diseases is related to the formation of blood clots. In addition, thrombosis is a common postoperative complication. In order to avoid thrombosis, postoperative patients generally need to continue taking antithrombotic drugs. However, since the half-life of thrombolytic drugs in plasma is short and there are systemic side effects, the effect is limited in clinical applications. Therefore, it is important to develop a drug delivery system capable of delivering a thrombolytic drug to a localized site of a thrombus to achieve a better thrombolytic effect and reduce systemic side effects.

Methods: This paper prepared nano silver particles (Ag NPs) with uniform particle size and stability, Ag NPs-embedded mesoporous silica nanoparticles (Ag NPs@SiO₂), and the thrombolytic drug urokinase plasminogen activator (uPA) encapsulated of Ag NPs@SiO₂ (Ag NPs@SiO₂-uPA). Then, they were characterized respectively. Finally, in vitro cytotoxicity test and in vitro thrombolysis effect were evaluated.

Results: The experimental results point out that the particle size of Ag NPs@SiO2 is about 1540 nm and the surface potential is -11.2 mV. The in vitro safety of nano-system Ag NPs@SiO2-uPA shows that it is not toxic to cells in a certain concentration range. The effect also has no obvious hemolysis; in the second in vitro thrombolysis experiment, the system exhibits a good thrombolytic effect.

Conclusion: In summary, the drug carrier Ag NPs@SiO2 has uniform particle size; the nano drug system Ag NPs@SiO2-uPA is safe in vitro and having suitable thrombolytic effect. In other word, through the construction of the above nano system, a more efficient, accurate and safe thrombolytic treatment solution can be realized, which is in line with the development trend of precision medicine.

Key words: antithrombotic; nanosilver mesoporous; silica; uPA

目录

摘要 Ⅰ

Abstract Ⅱ

第一章 文献综述 1

1.1 凝血机制与过程 1

1.2 血栓形成与治疗 1

1.2.1 血栓形成机制与分类 1

1.2.2 抗血栓药物研究现状 2

1.3 纳米药物载体的发展 2

1.3.1 纳米药物的优势 2

1.3.2 纳米材料的发展近况 3

1.4 纳米银粒子（Ag NPs）的性质及应用 4

1.5 介孔二氧化硅包裹的纳米银粒子（Ag NPs@SiO₂）的性质及应用 4

1.6 抗血栓纳米药物的研究意义 4

第二章 实验方法 6

2.1 实验试剂和仪器 6

2.1.1 实验试剂 6

2.1.2 实验仪器 7

2.2 Ag NPs的制备与表征 8

2.2.1 Ag NPs的制备 8

2.2.2 Ag NPs的表征 8

2.3 Ag NPs@SiO₂的合成与表征 8

2.3.1 Ag NPs@SiO₂的合成 8

2.3.2 Ag NPs@SiO₂的表征 9

2.4 Ag NPs@SiO₂-uPA的制备与表征 9

2.4.1 Ag NPs@SiO₂-uPA的制备 9

2.4.2 Ag NPs@SiO₂-uPA的表征 9

2.5 纳米体系的安全性评价 10

2.5.1 细胞复苏 10

2.5.2 细胞传代培养 11

2.5.3 体外细胞毒性评价 11

2.5.4 体外溶血实验 11

2.6 纳米体系体外溶栓效果的研究 12

第三章 结果与讨论 13

3.1 Ag NPs的表征 13

3.1.1 Ag NPs的特征吸收光谱 13

3.1.2 Ag NPs的形态学研究 13

3.1.3 Ag NPs的粒径和表面电位分析 13

3.2 Ag NPs@SiO₂的表征 14

3.2.1 Ag NPs@SiO₂的特征吸收光谱 14

3.2.2 Ag NPs@SiO₂的形态学研究 14

3.2.3 Ag NPs@SiO₂的粒径和表面电位分析 14

3.3 Ag NPs@SiO₂-uPA的表征 15

3.3.1 BCA法测定蛋白浓度 15

3.3.2 S-2444 法测定酶的活性 15

3.4 纳米体系的安全性评价 16

3.4.1 体外细胞毒性评价 16

3.4.2 体外溶血实验 16

3.5 纳米体系体外溶栓效果的研究 17

第四章 结论与展望 18

4.1 结论 18

4.2 课题研究展望 18

参考文献 20

致谢 22

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