1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1. 前言 抗生素是由细菌、霉菌、真菌或其他微生物的次生代谢产物，用以干扰或抵抗病原微生物的生存[1]。

自1928年发现并成功使用青霉素治疗人类疾病后，抗生素开始被广泛应用于医疗和养殖领域，甚至存在着严重的滥用现象，这诱导和加速了抗性基因（antibiotic resistance genes,args）的产生和传播[2]，成为严重威胁全球环境安全和公共卫生的重大问题。

报道指出2050年可能进入”后抗生素时代”，每年耐药感染的死亡人数可达1 000万，全球gdp损失累计可达100亿美元[3]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1 课题研究内容 1.1 南京长江水域mcr-1和ndm-1的污染特征 1.2 南京长江水域mcr-1和ndm-1携带菌的耐药特征 2 课题研究方法 2.1南京长江水域mcr-1和ndm-1的污染特征 2.1.1 采集水样 2.1.2 dna提取 每个样品分别经 0.22μm微孔滤膜过滤以富集微生物，将过滤后的滤膜剪碎直接投入dna提取管中，采用 dna 提取试剂盒进行 dna 提取，提取过程参照产品说明书。

每个样品平行提取2份 dna. 提取的 dna 用琼脂糖凝胶电泳进行鉴定，并用微量分光光度计进行浓度测定。

2.1.3抗性基因丰度测定 首先经过 pcr 得到 mcr-1 和 ndm-1 的基因片段，经1%琼脂糖凝胶电泳后纯化. 将纯化的产物克隆至大肠杆菌，挑取阳性克隆并提取质粒，测定浓度并计算拷贝数作为标准品。