文 献 综 述

1.人肿瘤坏死因子α概述

1.1人肿瘤坏死因子的结构

人肿瘤坏死因子α（a human tumor necrosis factor-α,hTNF-α）是由157个氨基酸组成的可溶性多肽，在体内以三聚体结构形式存在，体内多种细胞（如单核细胞、巨噬细胞、淋巴细胞、平滑肌细胞、成纤维细胞等）都能够产生和释放hTNF-α^[1]。成熟的TNF-α是由4个外显子和3 个内含子所构成，与组织兼容性复合体(major histocompatibility complex，MHC)基因群密切连锁，分别定位于第6对和第17对染色体上^[2]。

1.2人肿瘤坏死因子α的生物学功能

TNF-α是目前发现的抗肿瘤活性最强的细胞因子。它具有通过与两种细胞表面受体TNFR1和TNFR2结合而杀死肿瘤细胞的能力，从而通过激活死亡途径诱导细胞凋亡^[3]。尤其是其与干扰素-γ或美法仑联合用于抑制恶性肿瘤细胞生长的显著能力是迄今为止无法比拟的。不幸的是，当全身使用TNF-α治疗癌症患者时，临床发现严重的毒性作用，如高血压，肝功能异常，白细胞减少，寒战和血栓形成等^[4-6]。

2.外源蛋白在大肠杆菌中可溶性表达概述

2.1在大肠杆菌周质表达重组蛋白

大肠杆菌(Escherichia coli)是自然界中最为人们所熟识的生物体之一，作为生物技术中最常用的微生物表达系统之一， 具有操作简易、能在廉价培养基中迅速生长的特点， 是大多数科学研究及应用中实现蛋白表达的首选宿主。但大肠杆菌在表达一些含有复杂二硫键结构的或者需要转译后修饰的蛋白方面还存在一些问题^[7]。而由于大肠杆菌周质空间具有独特优势, 多数重组蛋白选择在大肠杆菌周质空间表达。

大肠杆菌有内膜和外膜组成的双层膜结构, 在内膜和外膜之间的区域即所谓的周质(pe ripla smic space)^[8]。周质中有一系列的酶，有利于蛋白质二硫键的正确形成，促进蛋白质的正确折叠，从而使外源性的蛋白产量得到提高。此外，大肠杆菌的周质空间蛋白含量低，蛋白酶活性也比胞质中低，在周质空间表达的外源性蛋白降解量也会降低，有利于对目标蛋白的浓缩。