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磷酸化线性多聚泛素的纯化制备开题报告

 2020-02-28 00:32:08  

1. 研究目的与意义(文献综述)

众所周知,蛋白质是生命活动的物质承担者。蛋白质的参与是各种生命活动得以进行的基础,从作为生物化学反应催化剂的酶,参与信号转导的小分子蛋白质,到参与有机体生理构成的蛋白质,蛋白质的身影在生命体的各类活动中随处可见。不同的生命活动需要不同的蛋白质参与,随着参与生命活动的不同,作为承担者的蛋白质,其组成序列、结构形态也千差万别,数量繁多的活动也就对应着恒河沙数的蛋白质。在这不可胜数的蛋白质之中,本实验聚焦于泛素这种蛋白质。

泛素(ubiquitin,ub)是一种高度保守的小分子蛋白质,分子量为8.45ku,由76个氨基酸序列组成,基本参与了真核细胞所有的生理活动。1975年首次从小牛的胰脏中分离出来,随后在除细菌外的许多不同有机体和组织中被发现,因而被冠以“泛”字(来源于拉丁文ubique,英文意思为everywhere)。在真核细胞中,当四个以上泛素与底物蛋白以共价键结合后,这个被标记的蛋白会输送到26s蛋白酶处,并快速降解。在后续研究中相关研究发现,泛素不仅参与蛋白质的降解,而且还在dna修复、基因转录调控、信号转导、调控细胞周期以及某些疾病的发病机理中占据重要位置。(2010)(黄新敏, 张艳霞 et al. 2010)

1.1泛素组成概述

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2. 研究的基本内容与方案

本课题的研究(设计)的目标:

(1)探索制备线性多聚泛素的高效途径,寻求最优化制备条件;

(2)探寻高效提纯多聚泛素以及磷酸化酶pink1的流程以及工艺条件;

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3. 研究计划与安排

第1——3周:查阅相关文献资料,明确研究内容,了解研究所需药品、仪器。确定方案,完成开题报告。

第4 ——8周:完成线性多聚泛素制备及pink1酶制备;

第9 ——12周:完成磷酸化实验;

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4. 参考文献(12篇以上)

[1] 黄新敏, 张艳霞, 万小荣. 泛素蛋白的研究进展 [j]. 广东农业科学, 2010,06): 191-4 7.

[2] 叶晓峰, 吴乔. 类泛素蛋白——sumo [j]. 细胞生物学杂志, 2004, 01): 10-4.

[3] 张思煜, 李方翊, 陈永湘. 泛素化蛋白的化学合成及半合成 [j]. 中国科学:化学, 2013, 08): 1022-32.

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