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摘 要

食品过敏原的种类有很多，花生是一种最普遍的过敏食物来源之一，而且它引发的过敏症状非常的严重。现在花生作为主要的食物过敏来源已经引起了广泛的社会关注，因此检测花生中的过敏原也十分重要。目前市面上对花生过敏原的检测技术很少，大多数使用的是酶联免疫吸附测定和PCR方法，但PCR法需要昂贵的设备，而且蛋白质在高温处理下不稳定，因此，本文建立了环介导等温扩增快速检测技术来检测食物中含有的花生组分。所建立的LAMP分析对花生有很高的特异性，与腰果、芒果、核桃、杏仁、夏威夷果、榛子、开心果、大豆无交叉反应，该方法对于食品中花生组分含量在1pg以上都有很好的检测效果，对高温高压、煮沸处理的研究结果也表明这些处理对于LAMP方法检测不会产生影响，并且这种方法对商业食品中含有花生组分的检测效果也很明显。该LAMP法的建立可以检测食品中可能含有的花生过敏原，从而保护致敏个体免受隐藏的过敏原侵害，因此这个方法的建立具有很大的意义，为食品中花生过敏原的检测提供很大的方便。

关键词：花生；食物过敏；环介导等温扩增

Abstract：There are many types of food allergens. Peanut is one of the most common sources of allergic food, and the allergic symptoms it causes are very serious. Peanuts have now attracted widespread social attention as a major source of food allergies, so it is also important to detect allergens in peanuts. At present, there are few detection techniques for peanut allergens on the market. Most of them use enzyme-linked immunosorbent assay and PCR method, but PCR requires expensive equipment and protein is unstable under high temperature treatment. Therefore, this paper establishes a ring. Isothermal amplification rapid detection techniques are used to detect peanut components contained in food. The established LAMP analysis has high specificity to peanuts and does not cross-react with cashew nuts, mangoes, walnuts, almonds, macadamia nuts, hazelnuts, pistachios, and soybeans. This method has a peanut component content of more than 1 pg in food. Good detection results, research results on high temperature and high pressure, boiling treatment also show that these treatments have no effect on the detection of LAMP method, and this method is also very effective in detecting peanut components in commercial foods. The establishment of this LAMP method can detect possible peanut allergens in food, so as to protect sensitized individuals from hidden allergens. Therefore, the establishment of this method is of great significance and provides great convenience for the detection of peanut allergens in food.

Key words：Peanut, allergic reaction, polymerase chain reaction

目录

1前言 4

1.1 过敏原的综述 4

1.1.1 过敏反应发生机制 4

1.1.2 如何避免过敏反应的发生 5

1.2 过敏原的检测方法 5

1.3 LAMP反应的特点 6

1.4 LAMP的研究进展 6

1.4.1 基本原理 6

1.4.2 引物设计方法 8

1.4.3 LAMP技术的应用 9

1.5 研究目的及研究内容 9

2材料与方法 10

2.1 实验材料 10

2.1.1 实验试剂 10

2.1.2 实验仪器及设备 11

2.2 实验方法 11

2.2.1 基因组的提取 11

2.2.2 基因组DNA的纯度和浓度测定 12

2.2.3 LAMP检测引物的设计与合成 12

2.2.4 LAMP反应体系的配制与合成 13

2.2.5 产物的检测 13

3实验结果 14

3.1 LAMP引物的分布图 14

3.2 特异性分析 14

3.3 灵敏度分析 15

3.4 煮沸处理 16

3.5 高温高压处理 17

3.6 商业化食品的检测 17

4讨论 18

结论 21

参考文献 22

致谢 24

1前言

1.1 过敏原的综述

过敏原也就是变应原是指能够让身体产生过敏反应的物质，当这种物质进入人的身体后，由于身体免疫系统对这种物质发生免疫应答而产生的一种反应。由于不同人群的免疫系统不同，所以他们对这些容易导致过敏反应的物质所表现的敏感程度也不同，也就是说这种物质可能对部分人产生过敏现象，而对其他人不会产生这种现象。正因如此，导致人们发生过敏的种类也就多种多样。现在，最常见的能够引发的过敏的物质就是食品过敏。所谓食品过敏就是饮食中的一些成分比如蛋白组分摄入到身体，我们身体的免疫系统受到这种成分的刺激，出现不好的过敏症状。有关学术报告表明，很多国外的儿童以及成人都遭受过由于食品引发的身体过敏症状的出现^［1］。国内专业的食品营养安全控制中心经调查发现学龄及青年阶段的身体健康的人群也有很多患有过食品过敏现象^［2］。食物过敏原就是食品中的某些成分在摄入身体后，会使身体产生过敏症状的食物。比较熟悉的能够引起过敏症状的食品有：乳制品(酸奶、乳酪等)，坚果类(花生、、核桃、开心果、腰果等)，谷物类(玉米、大米、四季豆、扁豆等)，糖果，调料，水果，以及海鲜(蚌、深海鱼类)等^［3］。

1.1.1 过敏反应发生机制

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