DNA支架用于体外番茄红素多酶合成体系的构建开题报告
2020-07-24 01:07
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述 1.1课题研究的意义与目的 番茄红素作为一种功能性天然色素,具有淬灭活性氧、消除人体自由基、预防心脏病、减缓动脉粥样硬化、预防多种癌症、保护心脑血管、抗老化、保护皮肤等生理功能,具有广泛的应用前景和较高的商业价值。
目前国内市场上此类产品的品种和数量都十分稀少,远远不能满足市场需要。
因此关于番茄红素的制备及其系列产品的开发,对增强国民健康水平和发展我国的食品工业具有十分现实的意义。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
本研究基于多酶合成的番茄红素体系,在无细胞环境中构建来番茄红素的合成途径,通过锌指蛋白能够特异性识别并结合DNA序列的原理,调控酶的顺序及距离,构建高效生产番茄红素的体系。
主要内容包括:(1)锌指蛋白结构域及DNA支架的确定及合成,引物和基因的构建策略的设计;(2)合成引物,采用重叠PCR将锌指蛋白基因与番茄红素合成酶基因连接,再利用酶切、一步克隆等方法构建融合蛋白的表达质粒;(3)重组质粒的的测序、酶切确定正确克隆,转化大肠杆菌进行酶的表达及纯化;(4)体外酶反应体系的构建,以及利用DNA支架对番茄红素的合成进行调控。
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